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分享一下NEST細胞培養(yǎng)過程中出現(xiàn)哪些問題

點擊次數(shù):1659 更新時間:2020-09-21
     NEST細胞培養(yǎng)對它不了解的朋友可能會覺得它很神秘,其實它的秘密很簡單,一個24孔板中一個大孔中包括1200個400um的倒置微孔,能將捕獲的單個iPS培養(yǎng)成類胚體,可以培養(yǎng)50至3000個一樣大小的細胞團!當你向培養(yǎng)板中加入細胞時,細胞會均勻的落入每個微孔孔中!它廣泛的應用于iPS/ES培養(yǎng)成類胚體!
 
    下面我就來給大家分享下NEST細胞培養(yǎng)過程中出現(xiàn)的問題:
 
    一、細胞成長曲線測守時為什么要做重復孔?
 
    答:測定細胞成長曲線細胞計數(shù)時挑選3個復孔,每孔分別計三次,取其平均值,目的是減小操作差錯。
 
    二、為什么制作的細胞成長曲線沒有到達平臺期?
 
    答:可能有以下原因:一是細胞接種密度過低;二是細胞培育時刻過短;三是細胞成長狀況欠好,使其不能正常增殖。
 
    三、怎么挑選細胞接種數(shù)?
 
    答:可根據(jù)細胞傳代培育過程中接種數(shù)及細胞成長周期進行核算,細胞接種數(shù)因細胞的不同而不同。
 
    四、細胞計數(shù)時為什么要用臺盼藍染色?
 
    答:參加臺盼藍后,活細胞不上色,臺盼藍上色的細胞呈深藍色,是不健康或已死亡的細胞,不能計數(shù)。
 
    五、測定細胞成長曲線的含義是什么?
 
    答:細胞成長曲線是測定細胞肯定成長數(shù)的常用辦法,也是斷定細胞生機的重要目標,是培育細胞生物學特性的基本參數(shù)。由于細胞太小,無法測單個細胞的成長狀況,所以測細胞集體的成長曲線。
 
    六、細胞成長曲線測定周期是幾天?
 
    答:一般是一個星期。
 
    七、細胞成長曲線還有其他辦法制作嗎?
 
    答:當然有。我們說到較多的是直接計數(shù)的辦法,除此以外還有相對計數(shù)的辦法,該類辦法首先要制作規(guī)范曲線,標定細胞數(shù)和某個變量的函數(shù),然后我們只需要測定每天這個變量的值便能夠核算出細胞數(shù)。常用的是MTT、CCK8等比色的辦法。
 
    八、為什么細胞計數(shù)多天,細胞數(shù)沒有添加反而削減?
 
    答:一般細胞傳代后,會有一個成長緩慢的潛伏期,細胞不增殖,而細胞會有正常的死亡,故細胞數(shù)不添加反而削減。
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